トランスフェクション手法

　トランスフェクション（transfection）とは、通常、核酸を真核細胞に、さらに具体的には動物細胞に導入することを意味します。従来、トランスフェクションという用語は、原核生物に感染したウイルス、すなわちバクテリオファージ由来のウイルス核酸が取り込まれることによって、感染および成熟ウイルス粒子の形成が生じることを意味しました。しかしながら、現在では、この用語はあらゆる人為的な手法を含む、外来核酸の細胞への導入を意味するようになりました。

人為的にある程度自由に核酸を導入する方法が多数ある。遺伝子導入方法における化学的手法、生物学的手法、物理的手法など多数あります。

＜出典：Wikipedia＞

　●　電気穿孔法（遺伝子エレクトロトランスファー）

　電気穿孔法（遺伝子エレクトロトランスファー）は広く使われている方法。細胞が強い電界の短いパルスにさらされると、細胞膜の透過性が一時的に増加する。 セルスクイージングは、MITでArmon Sharei、Robert Langer、Klavs Jensenによって2012年に発明された方法。 細胞膜の変形により細胞内に分子を送り込む。この方法は、細胞内伝達のために、ベクターを用いない高効率なマイクロ流路プラットフォーム。外生的材料や電界を使用しないため、毒性やオフターゲット効果の可能性を低減できる。

　●　ソノポレーション

　ソノポレーションは、高強度の超音波を使用して、細胞膜の細孔形成を誘導する方法。 この細孔形成は、キャビテーション核の素になる超音波造影剤の添加により強化されるため、主に気泡のキャビテーションが近傍の細胞膜と相互作用することによる。

　●　光学的トランスフェクション

　光学的トランスフェクションとは、高度に集束したレーザーを使用して、細胞膜に小さな穴（直径約1 μm）を一時的に生成する方法。この技法は、1984年に塚越らによって初めて記述されました。塚越らは、周波数を3倍にしたNd：YAGを使用して、正常なラット腎細胞の安定かつ一過性のトランスフェクションを生成した。この手法では、一度に1つの細胞が処理されるため、単一セルの分析に特に役立つ。

　●　プロトプラスト融合

　プロトプラスト融合は、細胞壁を除去するために、形質転換された細菌の細胞をリゾチームで処理する技法。 処理に続いて、目的の遺伝子を運ぶプロトプラストを標的の受容側の細胞と融合させるために、融合因子（例えば、センダイウイルス、PEG、エレクトロポレーション）を用いる。この方法の大きな欠点は、細菌の構成成分が非特異的に標的細胞に導入されることである。

　●　インペールフェクション

　インペールフェクションは、ナノファイバーの表面にDNAを結合し、細胞に挿入する方法。 このアプローチでは、一度に多数の細胞や組織に導入されるナノファイバーのセットを用いることも可能である。

　●　ハイドロダイナミック法

　ハイドロダイナミック法は、大型動物にはあまり使用されずマウスとラットで使用される方法。多くの場合、プラスミド（トランスポゾンを含む）のDNAを輸液に加え10秒未満で比較的大量の輸血を行うことでDNAを肝臓に送り込むことができる。この方法では、ほぼすべてのDNAが肝臓で発現する。

　⇒　形質転換と形質導入　（Transformation and transduction）